PRRSV流行毒株NSP2、ORF5遗传变异分析及其弱毒疫苗免疫效果评价

【摘要】猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)引起的一种高度接触性传染病,2006～2007年,中国南部暴发以死亡率高、传播速度快为特征的高致病性PRRSV(HP-PRRSV),给广大养殖户带来巨大经济冲击。为了解我国PRRSV流行情况和不同免疫背景下发病猪群相关毒株遗传进化和变异特点,本研究对我国不同地点和时间发病猪的病料进行PRRSV流行病学检测、病毒分离。目前,疫苗免疫是预防和控制]3P-PRRS的重要措施,虽然商品化弱毒疫苗较灭活苗可以更快诱发机体的特异性免疫,但在临床使用中弱毒疫苗的免疫时间、免疫剂量及免疫次数等方面经常出现使用混乱的现象,而且对其免疫效果仍缺乏较完善的评价体系,因此本研究对市场常用的两种商品化PRRS活疫苗JXA1-R和CH-1R进行了免疫效果评价。研究内容如下：1.PRRSV流行毒株的分离及遗传变异分析2012-2013年,本研究在湖北、湖南、广东、河南等地采集临床样品720份,PRRSV检测总阳性率为49.3%,分离得到46株遗传免疫背景清楚的样品,并对其部分NSP2基因、ORF5基因进行序列测定,比对显示46株PRRSV之间部分NSP2氨基酸同源性为83.8%-100%,NSP2蛋白普遍存在不连续30个氨基酸缺失,缺失位置与高致病性JXAl相同,同时46株PRRSV之间ORF5氨基酸同源性为91.0%-100%,与VR-2332相比,GP5序列出现多处突变,尤其是抗原表位序列,此外,N糖基化位点的位置和数量也发生了改变,对46株PRRSV的GP5TM区预测发现有33株序列存在氨基酸变异较高的TMl区。2.HZ-31全基因组序列分析分离得到一株新的PRRSV,命名为HZ-31,测序分析发现HZ-31的NSP2基因在471-500aa、533-561aa位点共缺失59个氨基酸,并且其基因组两端非编码区各存在一个碱基的缺失,是一种新的变异株。3.对JXA1-R活疫苗和CH-1R活疫苗进行免疫效果评价PRRS活疫苗可快速刺激机体产生体液免疫,JXA1-R活疫苗比CH-1R活疫苗的ELISA抗体转阳时间更早,水平更高,同时中和抗体出现时间更早,水平更高,在抵御强毒攻毒时,JXA1-R诱导宿主产生的中和抗体可中和血清中的PRRSV,与病毒血症的消除呈正相关。两种活疫苗在免疫和攻毒期间均未检测出高水平的IFN-γ。两种活疫苗在免疫期间均检测到病毒血症的存在,攻毒后JXA1-R组病毒血症迅速消失,CH-1R组的病毒血症持续存在。JXA1-R组和CH-1R组攻毒后均无鼻腔排毒,对照组轻微排毒,JXA1-R组攻毒后粪拭子无排毒,CH-1R组和对照组在攻毒后第10d均有排毒。剖检可见JXA1-R组病变轻微,CH-1R组个别猪只肺部有出血点,肺门淋巴结充血,对照组肺部肉样实变,肺门淋巴结严重充血、出血,个别猪只肾有出血点。JXA1-R组和CH-1R组在肺、脾、肾、脑的病毒载量与对照组差异显著。
【作者】沈俊莹；
【导师】江云波；
【作者基本信息】华中农业大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】猪繁殖与呼吸综合征；NSP2基因；ORF5基因；疫苗；免疫评价；

【参考文献】
[1]陈若萍.中国电信晋江分公司人力资源培训研究[D].华侨大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[2]刘呈祥.社会化媒体突发热点事件检测及其可信度分析方法研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[3]王希欣.WiMAX网络中基于休眠窗口调整的节能算法[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[4]张娜娜.血管紧张素Ⅱ诱导神经细胞衰老的作用及药物干预[D].山东大学,药理学,2013,硕士.
[5]徐功娣.序批式双外循环生物流化床特性及应用研究[D].上海大学,2006.
[6]苏行.电子软起动器的研究[D].浙江大学,2004.
[7]陈传涓,刘树范.宫颈上皮细胞图象的计算机分类[J].自动化学报,1982,03:215-221.
[8]何建明.半椎板切除术与全椎板切除术治疗椎管内肿瘤的系统评价[D].广西医科大学,脊柱骨外科学（专业学位）,2013,硕士.
[9]江炜.乙烯气相聚合颗粒粒径分布模型的研究[D].浙江大学,应用化学,2004,硕士.
[10]林智虹.高铁酸盐的制备及其应用研究[D].福建师范大学,物理化学,2004,硕士.
[11]吴世玲.苦茶（Camellia kucha （Chang et Wang）Chang）生物碱的积累特性研究[D].浙江大学,茶树生物技术与资源利用,2013,硕士.
[12]何建淼.我国跨国企业母子公司控制方式对绩效的影响研究[D].江南大学,企业管理,2012,硕士.
[13]朱炳瑞.基于Linux的移动终端研究[D].中北大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[14]李静.一个特殊时代里的一个特殊群体其民俗文化变迁与再认同[D].西北民族大学,民俗学,2012,硕士.
[15]刘红梅.论法治在构建和谐社会中的作用[D].延安大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[16]刘宗良,蔡镛.柔性石墨金属缠绕垫片的性能及其应用中的问题[J].石油化工设备.1992(03)
[17]寇智宁,支尊欧,徐国华,安越,何潮洪.多相态条件下环己烷长时间连续脱氢反应研究[J].高校化学工程学报,2014,06:1243-1248.
[18]王新宇.弹性与饱和孔隙介质层状地基动力特性研究[D].清华大学,水利工程,2012,硕士.
[19]王旭.销—盘法摩擦磨损实验的影响因素研究[D].东北大学,材料学,2010,硕士.
[20]张培新,汪静伟,黄亮,张冬云.锂离子电池硅基负极材料研究现状与发展趋势[J].深圳大学学报(理工版),2014,05:441-451.
[21]汪卫东.营销水平的竞争[J].汽车与配件.2005(13)
[22]潘奋.关于安全工程学研究的几个问题[J].中国安全科学学报.2000(05)
[23]高安慧.去甲肾上腺素对胎鼠室下带神经干细胞的作用研究[D].华东师范大学,生理学,2004,硕士.
[24]马艳利.混合整数非线性规划问题的分支定界算法研究[D].宁夏大学,计算数学,2014,硕士.
[25]朱扬荷.中国数字集群移动通信体制的优选准则[J].通讯世界.1998(09)
[26]杨绍明.基于B/S模式的CRM研究与应用[D].武汉理工大学,2004.
[27]李俊伟.多层皮革高速裁剪机主运动系统动力学性能分析及研制[D].浙江工业大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[28]江涓涓.我国独立学院学费设置问题研究[D].福建师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[29]赵真汝.铝镁合金抑爆材料的制备及其性能研究[D].郑州大学,材料工程（专业学位）,2013,硕士.
[30]艾吉昌.论缔约过失责任[D].外交学院,国际法,2003,硕士.
[31]夏超逸,张楠,夏禾,崔堃鹏.船舶撞击作用下车桥系统动力响应及高速列车运行安全分析[J].振动与冲击,2015,06:155-161.
[32]李飞.广西地区子宫颈癌患者HPV感染特点的初步研究[D].广西医科大学,妇科肿瘤学（专业学位）,2013,硕士.
[33]谢梦怡.大学生基本心理需要、自我概念与社会适应的关系研究[D].河北师范大学,应用心理,2014,硕士.
[34]冯辉霞,王滨,谭琳,雒和明,张德懿.导电聚合物基超级电容器电极材料研究进展[J].化工进展,2014,03:689-695.
[35]孙元章,杨军,张晓东,彭晓涛,刘焱.电力系统动态仿真中的继电保护模型[J].电力系统自动化,2009,20:47-51.
[36]张玲玉.内部控制信息披露质量影响因素研究[D].山东财经大学,会计学,2014,硕士.
[37]周慧.基于G-四链体探针和链置换放大的光学分析新方法[D].湖南大学,2012.
[38]李远智.亚高寒草甸不同空间尺度种内性状变异与群落构建机制研究[D].兰州大学,生态学,2013,硕士.
[39]青格乐图.母系氏族的人与神[D].内蒙古大学,美术学,2013,硕士.
[40]王铭升.介质流向对调节阀不平衡力及流速的影响[D].宁夏大学,机械工程,2014,硕士.
[41]张丽芳.蔡元培高教理念与当今高教改革[D].河北师范大学,教育学原理,2012,硕士.
[42]付三强,陈和平,胡经伟.烧结配料集散型过程控制系统[J].冶金自动化,1989,06:7-11.
[43]汪中杰.基于灰色理论的土质边坡稳定性分析及应用[D].西南交通大学,岩土工程,2014,硕士.
[44]范方田.EGFR信号诱导PKM2/β-catenin核转位促进原发性肝癌根治性切除术后早期复发[D].南京中医药大学,中药药理学,2014,博士.
[45]李慧.大鼠脑缺血再灌后Wnt7b/β-catenin信号通路在海马的表达与定位[D].山东大学,病理学与病理生理学,2013,硕士.
[46]鞠美晨.基于无水港的集装箱配备与空箱调运问题研究[D].大连海事大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[47]曾园.X企业高速公路服务区经营模式研究[D].武汉理工大学,交通运输规划与管理,2012,硕士.
[48]马智豪.中英铜官山矿权纠纷交涉研究[D].安徽大学,专门史,2014,硕士.
[49]董宁.股骨头骨坏死合并髋关节感染的诊断和治疗[D].吉林大学,外科学,2013,硕士.
[50]余彦洁.社会资本对大学生就业影响的实证研究[D].云南财经大学,西方经济学,2014,硕士.